Флуоресцентната микроскопија ја револуционизира нашата способност да визуелизираме и проучуваме биолошки примероци, овозможувајќи ни да истражуваме во сложениот свет на клетките и молекулите. Клучна компонента на флуоресцентната микроскопија е изворот на светлина што се користи за возбудување на флуоресцентните молекули во примерокот. Со текот на годините, користени се различни извори на светлина, секој со свои уникатни карактеристики и предности.
1. Жива светилка
Живата светилка под висок притисок, која се движи од 50 до 200 вати, е конструирана со кварцно стакло и има сферична форма. Внатре содржи одредена количина на жива. Кога работи, се јавува празнење помеѓу две електроди, предизвикувајќи испарување на живата, а внатрешниот притисок во сферата брзо се зголемува. Овој процес обично трае околу 5 до 15 минути.
Емисијата на жива светилка под висок притисок е резултат на распаѓање и намалување на молекулите на живата за време на празнењето на електродата, што доведува до емисија на светлосни фотони.
Емитира силна ултравиолетова и сино-виолетова светлина, што го прави погоден за возбудливи различни флуоресцентни материјали, поради што е широко користен во флуоресцентната микроскопија.
2. Ксенонски светилки
Друг најчесто користен извор на бела светлина во флуоресцентната микроскопија е ксенонската ламба. Ксенонските светилки, како живините светилки, обезбедуваат широк спектар на бранови должини од ултравиолетови до блиски инфрацрвени зраци. Сепак, тие се разликуваат во нивните спектри на возбуда.
Живите светилки ја концентрираат својата емисија во речиси ултравиолетовите, сините и зелените региони, што обезбедува генерирање на светли флуоресцентни сигнали, но доаѓа со силна фототоксичност. Следствено, HBO светилките обично се резервирани за фиксни примероци или слаба флуоресцентна слика. Спротивно на тоа, изворите на ксенонските светилки имаат помазен профил на возбудување, што овозможува споредување на интензитетот на различни бранови должини. Оваа карактеристика е поволна за апликации како мерење на концентрацијата на јони на калциум. Ксенонските ламби, исто така, покажуваат силно возбудување во опсегот блиску до инфрацрвениот опсег, особено околу 800-1000 nm.
XBO светилките ги имаат следните предности во однос на HBO светилките:
① Порамномерен спектрален интензитет
② Посилен спектрален интензитет во инфрацрвените и средните инфрацрвени региони
③ Поголема излезна енергија, што го олеснува достигнувањето на отворот на целта.
3. LED диоди
Во последниве години, се појави нов конкурент во областа на флуоресцентните микроскопски извори на светлина: LED диоди. LED диодите нудат предност за брзо вклучување-исклучување во милисекунди, намалување на времето на изложување на примерокот и продолжување на животниот век на деликатните примероци. Понатаму, LED светлината покажува брзо и прецизно распаѓање, значително намалувајќи ја фототоксичноста за време на долгорочните експерименти со живи клетки.
Во споредба со изворите на бела светлина, LED диодите обично емитираат во потесен спектар на возбуда. Сепак, достапни се повеќе LED ленти, што овозможуваат разновидни апликации за флуоресценција во повеќе бои, што ги прави LED диоди сè попопуларен избор во модерните поставки за флуоресцентна микроскопија.
4. Ласерски извор на светлина
Изворите на ласерската светлина се многу монохроматски и насочени, што ги прави идеални за микроскопија со висока резолуција, вклучително и техники со супер-резолуција како што се STED (Стимулирана трошење на емисиите) и PALM (Микроскопија со фотоактивирана локализација). Ласерската светлина обично се избира за да одговара на специфичната бранова должина на возбудување потребна за целниот флуорофор, обезбедувајќи висока селективност и прецизност во флуоресцентното возбудување.
Изборот на извор на светлина со флуоресцентен микроскоп зависи од специфичните експериментални барања и карактеристиките на примерокот. Ве молиме слободно контактирајте не доколку ви треба помош
Време на објавување: 13-ти септември 2023 година