Флуоресцентен микроскоп е вид на оптички микроскоп кој користи извор на светлина со висок интензитет за да го осветли примерокот и да ги возбуди флуорохромите во примерокот. Осветлувањето на примерокот обично се врши со извор на светлина што емитува ултравиолетова светлина. Тие се широко користени во биолошки, медицински и индустриски области.
Како функционира флуоресцентниот микроскоп?
Флуоресцентниот микроскоп користи жива или ксенонска ламба за да произведе ултравиолетова светлина. Светлината доаѓа во микроскопот и удира во дихроично огледало - огледало што рефлектира еден опсег на бранови должини и дозволува да помине друг опсег. Дихроичното огледало ја рефлектира ултравиолетовата светлина до примерокот. Некои примероци природно флуоресираат под ултравиолетова светлина бидејќи содржат флуоресцентни супстанции како што е хлорофилот. Ако примерокот што треба да се погледне природно не флуоресцира, може да се обои со флуоресцентни бои наречени флуорохроми.
Од што се состои флуоресцентниот микроскоп?
1. Извор на светлина
Најчестите извори на светлина се жива, ксенон и LED диоди. Меркур обезбедува најдобар квалитет на светлина за флуоресцентен микроскоп. LED диодите стануваат се попопуларни бидејќи се поевтини од другите извори и трошат помалку енергија.
| Жива светилка | Ксенонска ламба | LED | |
| Бранова должина на емитирана светлина | 350-370 nm | 400 nm - 450 nm | 400-700 nm |
| Животен век (час) | 200-300 | 400-600 | 10000 |
| Предност | 1. Светлина со висок интензитет, најчести извори на светлина. 2. Емитира силно ултравиолетово и сино-виолетово за да ги возбуди сите видови флуорофори. 3. Светли и шарени слики. | 1. Спектралниот интензитет е стабилен. 2. Силен спектрален интензитет во инфрацрвеното и средното инфрацрвено светло. | 1. Лесно се заменува. 2. Нема потреба од загревање. 3. Може да се вклучи и исклучи веднаш. 4. Контролирајте го интензитетот на изворот на светлина. |
| Недостаток | 1. Краток животен век. 2. Долго време на загревање. | 1. Потребна е специјална нисконапонска кутија за напојување со еднонасочна струја за вишок топлина. 2. Поскапа од жива светилка | 1. УВ светлината е послаба од жива светилка. 2. Секоја бранова должина на светлината бара посебна ЛЕР поради тесниот опсег што го емитираат. |
Меркур флуоресцентен додаток
LED флуоресцентен додаток
2. Филтер за возбудување
Филтерот за возбудување е суштински за работа на флуоресцентен микроскоп. Поминува светлина со пократка бранова должина, која флуоресцентната боја може да ја апсорбира. Исто така, ги блокира другите извори на возбудлива светлина.
Филтер за возбуда (B, G, U, V)
3. Дихроично огледало
Дихроичното огледало е вид на оптички филтер што ја рефлектира светлината на одредени бранови должини додека ги пренесува другите. Се користи во флуоресцентни микроскопи за раздвојување на брановите должини на возбудувањето и емисијата.
4. Филтер за емисија
Филтерот за емисија ги минува само брановите должини што ги емитираат флуорофорот и ја блокира целата несакана светлина надвор од оваа лента - особено брановите должини на возбудувањето.
5. Флуоресцентни бои
Флуоресцентните бои се органски соединенија кои поседуваат својство на флуоресценција, со што тие можат да формираат флуоресцентна слика со емитување видлива зелена светлина со силно контраст откако ќе се возбудат од високо осветлената ултравиолетова светлина. Најчесто користени флуоресцентни бои се; DAPI (49,6-диамидино-2-фенилиндол), акридин портокал, аурамин-родамин, Alexa Fluors или DyLight 488.
Колку видови на флуоресцентни микроскопи?
1. Исправен епифлуоресцентен микроскоп:
Тоа е најчестиот тип на флуоресцентен микроскоп. Побудувањето на флуорофорот и детекцијата на флуоресценцијата се врши преку истата светлосна патека (т.е. низ објективот). Поголемиот дел од флуоресцентните микроскопи, особено оние што се користат во науката за животот, се со дизајн на епифлуоресценција.
Истражувачки флуоресцентен биолошки микроскоп BS-2081F
2. Конфокален флуоресцентен микроскоп:
Конфокален флуоресцентен микроскоп: Овој тип на флуоресцентен микроскоп комбинира ласерско скенирање со флуоресцентно осветлување за да произведе слика. Може да се користи во широк спектар на апликации, како што се проучување на клетки и ткива, откривање на протеини и други супстанции во клетките и мерење на дебелината на материјалите.
Истражувачки флуоресцентен биолошки микроскоп BS-2081F
3. Превртен флуоресцентен микроскоп
Изворот на светлина и кондензаторот на овој вид микроскоп се наоѓаат на врвот, свртени надолу. Аголот на осветлување мора да биде на 90 степени во однос на површината на примерокот што се испитува.
BS-2095F Превртен флуоресцентен микроскоп
Кои се предностите и недостатоците на флуоресцентните микроскопи?
Предности:
- Овозможува набљудување на клетките во живите организми без нивно оштетување
- Обезбедува слики со висока резолуција со точни бои
- Овозможува проучување на живи процеси во клетките
- Да се користи за да се идентификуваат различни типови на молекули во клетките, како што се протеини или нуклеински киселини.
Недостатоци:
-Овозможува само набљудување на специфични структури во ќелија означена со флуоресцентна боја.
-Фотобелењето поради возбудувањето на електроните за време на процесот на флуоресценција може да влијае на реактивните молекули на флуоресцентните бои. Како резултат на тоа, реактивните бои може да ги загубат своите хемиски својства на интензитетот на флуоресцентна емисија.
-Клетките се подложни на фототоксичен ефект по боење со флуоресцентни бои, бидејќи молекулите на флуорофор ги апсорбираат високоенергетските фотони од светлината со кратка бранова должина.
Која е примената на флуоресцентниот микроскоп?
Флуоресцентните микроскопи се широко користени во различни полиња на истражување и примена, вклучувајќи биохемија, клеточна биологија, микробиологија, имунологија и медицина.
1. Во областа на биологијата, флуоресцентниот микроскоп овозможува точна и детална идентификација на клеточните и субмикроскопските клеточни компоненти и активности со помош на означување на флуоресцентна боја.
2. Во медицинското поле, флуоресцентниот микроскоп може да користи флуоресцентни реагенси за да открие присуство и дистрибуција на бактерии и вируси или да помогне во означување на хируршки цели за да се олесни операцијата.
3. Во областа на минералогијата, флуоресцентниот микроскоп често се користи за проучување на супстанции со спонтани флуоресцентни својства, како што се асфалтот, нафтата, јагленот, графен оксидот и други минерали.
4. Во науката за материјали, флуоресцентниот микроскоп може да се користи во текстилната индустрија или индустријата за хартија за да се анализираат материјалите базирани на влакна.
Време на објавување: Мар-14-2023